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近年來(lái)，腫瘤細(xì)胞免疫治療技術(shù)突飛猛進(jìn)，其中 CAR-T 療法發(fā)展最為成熟，已在血液腫瘤中展現(xiàn)出令人驚艷的療效，為患者的治療帶來(lái)了新希望。

據(jù)弗羅斯特沙利文預(yù)計(jì)，全球CAR-T療法市場(chǎng)空間將由2020年的10.8億美元增長(zhǎng)至2025年的90.5億美元，年均增速高達(dá)53%。細(xì)胞治療行業(yè)正在進(jìn)入一個(gè)快速增長(zhǎng)期。

然而，細(xì)胞治療藥物當(dāng)前仍處于CMC發(fā)展初期，相關(guān)法規(guī)要求也隨著科學(xué)、工藝技術(shù)以及對(duì)于細(xì)胞治療藥物全面認(rèn)知的發(fā)展而變化，病人的個(gè)體差異也對(duì)生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和一致性以及質(zhì)量的可控性形成挑戰(zhàn)，因此CMC的復(fù)雜性和難度相對(duì)于其它生物藥更大。根據(jù)FDA披露信息顯示，細(xì)胞治療多達(dá)80%發(fā)補(bǔ)與CMC相關(guān)，而傳統(tǒng)藥物的比例為20%。單一細(xì)胞治療產(chǎn)品的BLA文件可達(dá)60000頁(yè)，至少是典型傳統(tǒng)生物制品的十倍。

如何把握細(xì)胞治療CMC重難點(diǎn)，加快產(chǎn)品上市進(jìn)展？博騰生物細(xì)胞治療工藝開(kāi)發(fā)助理副總經(jīng)理胡迪超博士分享了他的經(jīng)驗(yàn)～

胡迪超 博士

博騰生物細(xì)胞治療工藝開(kāi)發(fā)助理副總經(jīng)理

一、可以介紹一下CAR-T的制備流程嗎？

CAR-T技術(shù)是通過(guò)基因修飾技術(shù)將能特異性識(shí)別腫瘤特異性抗原的CAR分子結(jié)構(gòu)導(dǎo)入人體T細(xì)胞，從而形成CAR-T細(xì)胞，其能夠特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞，從而發(fā)揮高效殺傷腫瘤細(xì)胞而達(dá)到治療的效果。

目前上市的CAR-T產(chǎn)品均為自體細(xì)胞細(xì)胞治療藥物，自體CAR-T制備主要包括以下步驟： 

（1）單采血采集：首先需對(duì)患者采集單采血，此過(guò)程通常在醫(yī)院端完成。

（2）PBMC分離：利用密度梯度離心的原理，使用自動(dòng)化設(shè)備分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)。

（3）T細(xì)胞富集(可選)：使用CD4/CD8磁珠或CD3磁珠聯(lián)合自動(dòng)化分離設(shè)備富集CD3+T細(xì)胞。 

（4）T細(xì)胞激活：使用CD3/CD28抗體或磁珠對(duì)靜息狀態(tài)的T細(xì)胞進(jìn)行激活。 

（5）T細(xì)胞修飾：利用基因修飾技術(shù)，通常使用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)將攜帶CAR分子的基因序列投遞至T細(xì)胞的基因組中，使其可持續(xù)表達(dá)CAR分子，并裝配在T細(xì)胞表面，從而形成CAR-T細(xì)胞。

（6）CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增：為了獲得足夠量的用于QC放行檢測(cè)以及治療用的CAR-T細(xì)胞，需使用細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增技術(shù)對(duì)CAR-T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。

（7）CAR-T細(xì)胞收獲和洗滌：細(xì)胞擴(kuò)增到目標(biāo)數(shù)量后，使用自動(dòng)化收獲設(shè)備收獲CAR-T細(xì)胞，并利用離心洗滌原理去除CAR-T生產(chǎn)過(guò)程中加入的生產(chǎn)原材料以去除工藝相關(guān)雜質(zhì)。

（8）CAR-T細(xì)胞制劑和凍存：使用開(kāi)發(fā)的凍存液調(diào)整CAR-T細(xì)胞密度至所需的密度，按既定的分裝體積分裝凍存袋后使用梯度降溫儀對(duì)CAR-T細(xì)胞進(jìn)行凍存。

（9）CAR-T放行檢測(cè)與回輸：生產(chǎn)的CAR-T細(xì)胞經(jīng)QC檢測(cè)合格后就可以以冷鏈的方式運(yùn)輸?shù)结t(yī)院終端，并回輸給患者發(fā)揮藥物治療作用。

CAR-T療法示例

來(lái)源：沙利文分析

二、CAR-T產(chǎn)品工藝復(fù)雜，在CMC工程中，最大的難點(diǎn)是什么？如何應(yīng)對(duì)？

CAR-T細(xì)胞治療藥物與普通創(chuàng)新藥物在 CMC 環(huán)節(jié)有很大差異，難點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾方面： 

一是，工藝的穩(wěn)定性和一致性以及質(zhì)量的可控性。CAR-T制備所用到的起始物料來(lái)源于donors血液中提取的T細(xì)胞。而目前已獲批的CAR-T細(xì)胞藥物均為自體CAR-T，donors為患者，個(gè)體間差異很大，從而導(dǎo)致CAR-T生產(chǎn)的起始物料差異很大，對(duì)CAR-T工藝的穩(wěn)定性和一致性以及質(zhì)量可控性帶來(lái)很大挑戰(zhàn)。而且在IND申報(bào)時(shí)，使用的是健康人donors，但在商業(yè)化階段，使用的是病人donors，這也是對(duì)工藝的一個(gè)挑戰(zhàn)。此外，CAR-T細(xì)胞通常使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體或慢病毒載體進(jìn)行T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)，病毒載體批間的差異也會(huì)對(duì)工藝的穩(wěn)定性和一致性形成挑戰(zhàn)。 

二是，成本問(wèn)題。目前的CAR-T細(xì)胞藥物可以說(shuō)是“天價(jià)藥物”，國(guó)外定價(jià)35-50萬(wàn)美元/劑，國(guó)內(nèi)目前上市的兩款CAR-T細(xì)胞藥物價(jià)格也高達(dá)120萬(wàn)元/劑左右。高昂的治療費(fèi)用是影響藥物可及性或者說(shuō)可負(fù)擔(dān)性的重要因素，因此如何降低生產(chǎn)成本是CAR-T產(chǎn)品面臨的另一個(gè)挑戰(zhàn)。目前來(lái)看，自體CAR-T降價(jià)空間仍然有限，但基于貨架期的通用CAR-T細(xì)胞藥物，即通用型CAR-T或異體CAR-T有很大潛力。目前通用型CAR-T尚無(wú)上市產(chǎn)品，但已有多個(gè)項(xiàng)目進(jìn)入臨床研究階段。未來(lái)如果通用型CAR-T能順利獲批上市，或者在技術(shù)層面有其他突破，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，就有可能大幅降低成本。

當(dāng)然，CAR-T產(chǎn)品CMC還面臨很多其他挑戰(zhàn)，比如說(shuō)生物活性方法的開(kāi)發(fā)和檢測(cè)；快速放行檢測(cè)等都還面臨挑戰(zhàn)。此外，通用型CAR-T還需要考慮基因編輯技術(shù)專(zhuān)利的問(wèn)題，物料供應(yīng)問(wèn)題等等。

三、細(xì)胞治療藥物在中國(guó)與國(guó)際監(jiān)管有何異同點(diǎn)？

首先從監(jiān)管機(jī)構(gòu)來(lái)看，目前國(guó)內(nèi)外基本都實(shí)行雙軌制，在細(xì)胞產(chǎn)品沒(méi)有上市時(shí)，按照安慰用藥或者研究者發(fā)起的臨床研究（Investigator Initiated Trial，IIT）管理；在細(xì)胞產(chǎn)品作為成熟藥品上市時(shí)，按照嚴(yán)格的生物制藥法規(guī)和審批流程進(jìn)行管理。

從產(chǎn)品的監(jiān)管分類(lèi)來(lái)看，美歐、日本將細(xì)胞治療設(shè)為一個(gè)專(zhuān)門(mén)的類(lèi)別來(lái)管理。例如，美國(guó)將細(xì)胞治療藥物歸類(lèi)為細(xì)胞、組織或基于細(xì)胞組織的產(chǎn)品管理；歐盟將細(xì)胞治療藥物歸類(lèi)為先進(jìn)的治療醫(yī)學(xué)藥品。在中國(guó)，目前將細(xì)胞治療藥物歸類(lèi)為生物制品，并沒(méi)有單獨(dú)設(shè)立一個(gè)類(lèi)別。

從監(jiān)管的專(zhuān)業(yè)程度來(lái)看，目前中國(guó)在監(jiān)管架構(gòu)上和國(guó)際上有一定差異。在中國(guó)，早期曾將細(xì)胞治療作為一種醫(yī)療技術(shù)，由衛(wèi)生醫(yī)院系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)管，近幾年才將細(xì)胞治療產(chǎn)品劃歸為藥品監(jiān)督管理部門(mén)作為生物制品進(jìn)行管理，而美國(guó)和歐洲為此額外地設(shè)立了細(xì)胞治療藥物的監(jiān)管機(jī)構(gòu)。

目前，細(xì)胞治療藥物技術(shù)革新較快，監(jiān)管要求更新也很快，企業(yè)如何應(yīng)對(duì)這種快速變化，才能讓產(chǎn)品順利獲批？

首先，我們要對(duì)法規(guī)進(jìn)行細(xì)致的解讀，在細(xì)胞治療藥物的研發(fā)、生產(chǎn)過(guò)程中嚴(yán)格遵照國(guó)內(nèi)外法規(guī)開(kāi)展CMC活動(dòng)。當(dāng)然細(xì)胞治療藥物發(fā)展尚處于初期，法規(guī)也在不斷進(jìn)行調(diào)整，所以我們還要及時(shí)跟進(jìn)新的法規(guī)、要求。

其次，企業(yè)一定要加強(qiáng)GMP的意識(shí)。因?yàn)榧?xì)胞治療產(chǎn)品的特殊性，它沒(méi)有終端除菌過(guò)濾步驟，所以從廠房的設(shè)計(jì)、設(shè)備選型、工藝研究開(kāi)發(fā)，到人員都要強(qiáng)化GMP意識(shí)。對(duì)于一個(gè)細(xì)胞治療項(xiàng)目，需充分理解QbD的理念，開(kāi)展充分的分子設(shè)計(jì)和成效性研究。

再次，合理的臨床設(shè)計(jì)，適應(yīng)癥的選擇，規(guī)范的臨床試驗(yàn)，安全性和有效性數(shù)據(jù)詳實(shí)也是獲批的重要因素。

然后，對(duì)于細(xì)胞治療的新技術(shù)，一定要與藥監(jiān)部門(mén)和相關(guān)專(zhuān)家保持充分溝通。現(xiàn)在很多做新技術(shù)的可能是science背景出身，但我們也要考慮到這種新技術(shù)應(yīng)用到CMC階段會(huì)不會(huì)有法規(guī)上的問(wèn)題，所以對(duì)于新技術(shù)，一定要與相關(guān)的監(jiān)管部門(mén)和專(zhuān)家保持溝通與討論。

另外，企業(yè)可以考慮與CMO/CDMO公司的深度合作。因?yàn)榧?xì)胞治療產(chǎn)品在CMC方面比較復(fù)雜，涉及質(zhì)粒、病毒、細(xì)胞等，CMO/CDMO公司有一個(gè)比較成熟的工藝生產(chǎn)和質(zhì)量體系，而且實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)比較豐富，所以biotech公司可以考慮與CMO/CDMO公司保持緊密的合作，這有助于項(xiàng)目順利推進(jìn)和申報(bào)成功。

四、未來(lái)細(xì)胞治療藥物還有哪些發(fā)展趨勢(shì)？

CAR-T療法作為近年來(lái)熱點(diǎn)研發(fā)領(lǐng)域已為惡性血液腫瘤患者帶來(lái)了希望，例如傳奇生物的BCMA CAR-T療法西達(dá)基奧侖賽(CARVYKTI®)的總緩解率ORR高達(dá)97.9%，療效非常令人驚艷。

基于此，CAR-T療法市場(chǎng)規(guī)模實(shí)現(xiàn)持續(xù)穩(wěn)定增長(zhǎng)，未來(lái)市場(chǎng)潛力巨大。據(jù)弗羅斯特沙利文預(yù)計(jì)，全球CAR-T療法市場(chǎng)規(guī)模將由2020年的10.8億美元增長(zhǎng)至2025年的90.5億美元，年均增速高達(dá)53%。

全球、美國(guó)及中國(guó)CAR-T療法市場(chǎng)規(guī)模

（2017年、2020年及2025年（估計(jì)）） 

來(lái)源：沙利文分析

目前，國(guó)內(nèi)已上市的兩款CAR-T療法產(chǎn)品，復(fù)星凱特的阿基侖賽（奕凱達(dá)）的藥明巨諾的瑞基奧侖賽注射液（倍諾達(dá)），前者去年上市6個(gè)月銷(xiāo)售額1億元，后者上市3個(gè)月，已為藥明巨諾貢獻(xiàn)營(yíng)收3079.7萬(wàn)元。而今年3月獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)的傳奇生物的Carvykti，首個(gè)完整上市季度就完成了2400萬(wàn)美元的銷(xiāo)售額。可見(jiàn)市場(chǎng)潛力很大。

對(duì)于細(xì)胞療法的發(fā)展趨勢(shì)，從適應(yīng)癥來(lái)看，未來(lái)細(xì)胞療法在實(shí)體瘤方面有望取得突破性進(jìn)展。目前CAR-T療法已在血液瘤方面取得不錯(cuò)成績(jī)，而在實(shí)體瘤方面，目前尚無(wú)產(chǎn)品獲批上市，不過(guò)從已披露的臨床數(shù)據(jù)看來(lái)，已有產(chǎn)品展現(xiàn)出很好的治療潛力。

從技術(shù)來(lái)看，通用型細(xì)胞療法或者異體細(xì)胞療法，包括UCAR-T、CAR-NK、以及基于iPSC的細(xì)胞治療藥等，對(duì)于降低生產(chǎn)成本，提高藥物的可及性具有很大優(yōu)勢(shì)，未來(lái)可能會(huì)有比較大的突破。

此外，隨著通用型細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展，未來(lái)細(xì)胞生產(chǎn)規(guī)模也將得到大幅提升，而市場(chǎng)規(guī)模的增大，將進(jìn)一步帶動(dòng)上下游供應(yīng)鏈發(fā)展從而降低成本，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞治療藥物的成本控制，最終提高藥物的可及性。

至于降價(jià)空間，胡博認(rèn)為不可預(yù)測(cè)，不過(guò)通用型細(xì)胞療法未來(lái)從百萬(wàn)級(jí)降到十萬(wàn)級(jí)是很有可能的，將惠及更多患者。